Conteo celular de microalgas paso a paso

El conteo celular es uno de los mejores métodos para evaluar la concentración de microalgas, este método de conteo celular proporciona datos precisos sobre el número de células presentes y permiten realizar análisis estadísticos y seguimiento del crecimiento a lo largo del tiempo.

Para llevarlo acabo es necesario un microscopio y una cámara Neubauer o hemocitómetro. El hemocitómetro es un dispositivo de vidrio especializado que permite contar las células en un área específica como se muestra en la (Figura. 1).

A continuación, detallaremos el procedimiento de la evaluación de la concentración de microalgas usando el método de la cámara de Neubauer.

1. Obtención de biomasa
Es importante tener una muestra de microalgas óptima y libre de contaminación para realizar la evaluación. Según la concentración de estas será necesario en algunas ocasiones realizar la dilución de las microalgas con agua destilada para facilitarnos el conteo y realizar un conteo correcto.

Figura 1. Cultivo de microalgas.

2. Dilución de la muestra
Para realizar la dilución de muestras muy concentradas como la que se muestra en la (Figura. 1) se puede usar la siguiente fórmula si queremos preparar 10 ml de una muestra de microalgas diluida 5x:

Es decir, si queremos diluir cinco veces la muestra de microalgas y preparar 10 ml de esa dilución tendríamos que utilizar 2 ml de la muestra de microalgas y añadir 8 ml de agua destilada, de esta manera tendríamos la muestra diluida 5 veces.

Si evaluamos la ecuación nos daremos cuenta de que al dividir el volumen total con el volumen de muestra a utilizar nos dará 5 el cual es el número de dilución que deseamos conseguir.

Es decir, si queremos determinar cuántos mililitros de microalgas se tienen que utilizar para lograr una concentración X podemos usar la siguiente fórmula.

Ejemplo: Queremos lograr una dilución de 50 de una muestra de microalgas, y queremos preparar un volumen total de microalgas de 10 ml, ¿Cuántos mililitros de muestra debemos usar?:

Es decir, necesitaremos 0.2 ml de muestra o 200 ul de muestra.

Figura 2. Muestras diluidas de microalgas.

3. Preparación de la muestra en la cámara de Neubauer

Una vez que ya se tienen las muestras diluidas debemos colocar la muestra en la cámara de Neubauer, por lo cual es necesario usar una micropipeta de 10 ul. Entonces extraemos 10ul de muestra y lo colocamos en un cuadrante de la cámara de Neubauer, después colocamos cuidadosamente el cubreobjetos y listo observaremos las microalgas en la cámara como se muestra en la (Figura. 2).

Figura. 3. Ejemplificación de los cuadrantes de la cámara de Neubauer.

La cámara de Neubauer se caracteriza por dividirse en múltiples cuadrantes, siendo 9 cuadrantes los principales como se enumera en la (Figura. 3). Para realizar el conteo debemos contar las microalgas en el cuadrante 1, 3, 7 y 9. Se recomienda leer a 40x para observar correctamente las microalgas.

Figura. 4. Muestras concentradas de microalgas.

4. Determinación de la concentración

Una vez que se realiza el conteo de las microalgas aplicaremos la fórmula:

Ecuación de concentración celular.

Ejemplo: En el caso que hayamos realizado el conteo de microalgas a una dilución de 5 y hayamos contado 100, 103, 102 y 110 en los cuadrantes 1, 3, 7 y 9 podríamos realizar los siguientes cálculos.

Entonces la concentración de microalgas seria de

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